2013初级药师考试辅导：色谱法

　　第六章 色谱法

　　色谱法：是一种物理或物理化学分离方法，系将混合物中各组分分离后在线或离线分析的方法。色谱法具有高灵敏度、高选择性、高效能、分析速度快及应用范围广等优点，是分析混合物的最有效手段。色谱法用于药品鉴别、纯度检查和含量测定。

　　第一节 概论

　　色谱法按分离原理分为：吸附色谱法、分配色谱法、离子交换色谱法与分子排阻色潽法等。

　　吸附色谱法如气—固色谱法(GSC)、液—固色谱法(LSC)等。吸附色谱法在薄层色谱法(TLC)中广泛应用，在高效液相色谱法(HPLC)和气相色谱法(GC)也应用较多。

　　《中国药典》将色谱法分纸色谱法、薄层色谱法、柱色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法及电泳法。

　　第二节 薄层色谱法(TLC)

　　常用固定相：1、硅胶是薄层色谱法中应用最多的固定相，通常用SiO2·XH2O表示。2氧化铝 色谱用氧化铝有碱性、中性和酸性三种。3、聚酰胺 是一种有机薄层材料。

　　点样：点样基线距底线2.0cm，点样直径2~4mm，点间距一般为1.0~2.0cm。点样时必须注意勿损伤薄层板表面。

　　比移值：比移值(Rf)系指从点样基线至展开斑点中心(重量重心)的距离(l)与从基线至展开剂前沿的距离(l0)的比值。 Rf = l/ l0

　　Rf 最佳范围是0.3-0.5 ，可用范围是0.2-0.8 。

　　第三节 高效液相色谱法(HPLC)

　　HPLC基本构造：1、高压输液泵 2、色谱柱 3、进样阀 4、检测器：紫外吸收检测器、荧光检测器、差示折光检测器、电化学检测

　　检测器的类型和适用范围：1、选择性检测器：①紫外检测器：适用于具有共轭结构的化合物的检测，如芳香化合物、核酸及甾体激素等。另外，利用末端吸收还可以用于具有羰基、羧基等基团的化合物的检测 ②荧光检测器：如多环芳烃、氨基酸、维生素、甾体化合物及酶类等的检测 ③电化学检测器：使用较少，一般仅用于无紫外吸收或荧光的化合物的测定 ④质谱检测器：主要用于大分子物质的检测，如蛋白质、多肽等，以及色谱峰的纯度或原料药中的杂质检查 2、通用型检测器：①示差折光检测器：如糖类的检测 ②蒸发光散射检测器：测定硫酸庆大霉素中C组分的含量。 蒸发光散射检测器和质谱检测器通常不允许使用含有不会发盐组分的流动相。

　　色谱系统适用性试验系指用规定的对照品对色谱系统进行试验。

　　应用：1、在鉴别中的应用：常利用保留值进行鉴别，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液的一致 2、在杂质检查中的应用：①内标法加校正因子测定供试品中某个杂质中某个杂质的含量 ②外标法测定供试品中某个杂质的含量 ③加校正因子的主成分自身对照法 ④不加校正因子的主成分自身对照法 ⑤面积归一化法

　　第四节 气相色谱法(GC)

　　气相色谱法：以气体为流动相的色谱法称为气相色谱法。不适用于难挥发和热稳定性差的物质分析。

　　气相色谱法具有分离效能高、灵敏度高、样品用量少、分析速度快等优点，但受药品蒸汽压限制，不适用于难挥发和热稳定性差的物质的分析。

　　常用检测器：火焰离子化检测器(FID)、氮磷检测器(NPD)、火焰光度检测器(FPD)、电子捕获检测器(ECD)、质谱检测器(MS)、热导检测器(TCD)

　　第五节 电泳法

　　电泳法：在电场的作用下，依据各组分之间淌度的不同实现分离的方法。分离程度取决于淌度之差。

　　电泳法适用于蛋白质、核酸等生化药物的分析。

　　各类电泳法：1、纸电泳法 2、醋酸纤维素电泳法：主要用于测定蛋白质相对百分含量 3、琼脂糖凝胶电泳法 4、聚丙烯酰胺凝胶电泳法 5、SDS聚丙烯胺凝胶电泳法：测定蛋白质的分子量

　　毛细管电泳法(CE)：以弹性石英毛细管为分离通道，高压直流电场为驱动力，依据样品中各组分之间的淌度和分配行为上的差异而实现分离的分析方法

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