2013执业药师药物分析：荧光分析法

　　荧光分析法

　　一、基本原理

　　荧光的产生：此化学物质能从外界吸收并储存能量(如光能、化学能等)而进入激发态，当其从激发态再回复到基态时，过剩的能量可以电磁辐射的形式放射(即发光)。荧光发射的特点是：可产生荧光的分子或原子在接受能量后即刻引起发光;而一旦停止供能，发光(荧光)现象也随之在瞬间内消失。

　　发射荧光的光量子数亦即荧光强度，除受激发光强度影响外，也与激发光的波长有关。各个荧光分子有其特定的吸收光谱和发射光谱(荧光光谱)，即在某一特定波长处有最大吸收峰和最大发射峰。选择激发光波长量接近于荧光分子的最大吸收峰

　　物质的激发光谱和荧光发射光谱，可以用作该物质的定性分析。当激发光强度、波长、所用溶剂及温度等条件固定时，物质在一定浓度范围内，其发射光强度与溶液中该物质的浓度成正比关系，可以用作定量分析。荧光分析法的灵敏度一般较紫外分光光度法或比色法为高，浓度太大的溶液会有“自熄灭”作用，故荧光分析法应在低浓度溶液中进行。

　　二、荧光分光光度计

　　激发光源→激发光单色器→样品池

　　↓

　　发射光单色器→检测器→数据记录处理

　　样品池用低荧光材料制成，四面透光，发射光方向与激发光成直角。

　　三、应用

　　荧光分析可用于鉴别和含量测定。一般采用对照品比较法测定含量，灵敏度高、选择性好，但干扰多、线性范围窄，多用于需要高灵敏度和允许较大变异性的样品分析。

　　第三节 红外分光光度法

　　一、基本原理

　　红外光谱是由分子的振动、转动能极引起的光谱。当用一定频率的红外光照射某物质分子时，若该物质的分子中某基团的振动频率与它相同，则此物质就能吸收这种红外光，使分子由振动基态跃迁到激发态。

　　因此，若用不同频率的红外光依次通过测定分子时，就会出现不同强弱的吸收现象。用T%-λ作图就得到其红外光吸收光谱。红外光谱具有很高的特征性，每种化合物都具有特征的红外光谱。用它可进行物质的结构分析和定量测定。

　　二、红外光谱仪

　　光源-吸收池-单色器-检测器-数据记录和处理

　　三、红外光谱与物质结构的关系

　　一般将振动形式分成两类：伸缩振动和变形振动。

　　(1)伸缩振动

　　表示。n　　原子沿键轴方向伸缩，键长发生变化而键角不变的振动称为伸缩振动，用符号ν

　　(2)变形振动(又称弯曲振动或变角振动)

　　基团键角发生周期变化而键长不变的振动称为变形振动，面内变形振动又分为剪式(以δ表示)和平面摇摆振动。

　　红外光谱区可分成4000 cm-1 ~1300cm-1和1300 cm-1 ~ 400 cm-1两个区域。最有分析价值的基团频率在4000 cm-1 ~ 1300 cm-1 之间，这一区域称为基团频率区、官能团区或特征区。区内的峰是由伸缩振动产生的吸收带，比较稀疏，容易辨认，常用于鉴定官能团。

　　四、应用

　　1鉴别：红外光谱特征性强，鉴别时按《药品红外光谱集》中收载的制备方法制备，与该品种对照图谱比较应一致。

　　2.检查：依据药物与其同质异晶杂质在特定波数的吸收有显著差异，对无效或低效晶型进行检查

　　【A型题】

　　1溶液的厚度不变时，吸收系数的大小取决于

　　A光的波长

　　B溶液浓度

　　C光线强弱

　　D溶液颜色

　　E仪器性能

　　参考答案B

　　2紫外分光光度法测定药物含量时，应采用

　　A石英管

　　B石英吸收池

　　C玻璃比色皿

　　D玻璃吸收池

　　E样品室

　　参考答案B

　　3紫外-可见吸收光谱属于

　　A电子跃迁光谱

　　B分子振动光谱

　　C发射光谱

　　D荧光光谱

　　E原子吸收光谱

　　参考答案A

　　4在测定吸收度时，为消除溶剂及其他因素的影响，一般需用

　　A空白校正

　　B溶剂校正

　　C仪器校正

　　D波长校正

　　E对照实验

　　参考答案A

　　5采用紫外-可见分光光度法测定药物含量时，配制待测溶液浓度应使

　　A测得吸收度尽量大

　　B吸收度大于0.1

　　C吸收度大于0.7

　　D吸收度在0.1～0.8

　　E吸收度在0.3～0.7

　　参考答案E

　　6红外吸收光谱又称

　　A吸收光谱

　　B电子跃迁光谱

　　C分子振动光谱

　　D分子转动光谱

　　E分子振动-转动光谱

　　参考答案E

　　7被分离组分在固定相与流动相之间分配达到平衡时浓度比称为

　　A浓度比

　　B质量比

　　C分配系数

　　D容量因子

　　E质量分配系数

　　参考答案C

　　8TLC的最佳Rf值范围是

　　A0.1～0.9

　　B0.2～0.8

　　C0.3～0.5

　　D0.4～0.6

　　E0.3～0.7

　　参考答案C

　　9 HPLC最常用的检测器是

　　A热导检测器

　　B电子捕获检测器

　　C氢火焰离子化检测器

　　D荧光检测器

　　E紫外检测器

　　参考答案E

　　【B型题】

　　A3300～3000cm-1

　　B1300～1000cm-1

　　C1900～1650cm-1

　　D1000～650cm-1

　　E3750～3000cm-1

　　1νOH或νNH

　　2ν≡H

　　3νC-O

　　4νC=O

　　参考答案1E 2A 3B 4C

　　A峰高

　　B峰面积

　　C峰宽

　　D调整保留时间

　　E峰位

　　5用于定量测定的色谱参数

　　6用于衡量柱效的参数

　　7用于鉴别药物的色谱参数

　　8被分离组分在固定相中停留时间

　　参考答案5B 6C 7E 8D

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