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　　紫外—可见分光光度法

　　一、基本原理

　　紫外—可见吸收光谱属分子吸收光谱，是由分子的外层价电子跃迁产生的。

　　Lambert-Beer定律 A=ECL

　　A为吸收度，E为吸收系数，C为被测物质溶液浓度，L为光路长度。吸收系数E是物质的物理常数，随浓度C单位的不同有不同表示方法。

　　药品检验中使用百分吸收系数，物理意义是当吸光物质溶液浓度为1%(1g/100 ml)，液层厚度为1cm时的吸收度。

　　二、可见-紫外分光光度计

　　光源-单色器-吸收池-检测器-数据记录和处理

　　1.光源：紫外区采用氢灯或氘灯，可见光区采用钨灯

　　2.单色器：狭缝宽度大，单色光纯度差;宽度过小，检测灵敏度降低

　　3.吸收池：玻璃池适用于370nm以上的可见光区，石英池适用于紫外、可见光区，通常仅在紫外光区使用

　　三、吸收度的测定方法

　　1.对溶剂的要求：能充分溶解样品，与样品无相互作用，挥发性小，在测定波长处的吸收应符合要求

　　2.空白对照实验：将溶剂装入参比池，调节吸收度为0，去除溶剂和容器吸收、光散射、反射的影响。

　　3.测定波长确证

　　4.供试品溶液浓度：使吸收度在0.3～0.7范围内。

　　5.狭缝宽度：以减少狭缝宽度时，供试品溶液吸收度不再增加为准。

　　五、应用

　　1.鉴别

　　(1) 对比吸收光谱特征参数：核对供试品溶液λmax、、A是否符合规定。可同时用几个峰位作为鉴别依据

　　(2) 比较吸收度比值一致性：吸收峰较多时，规定几个波长处吸收度比值作为鉴定标准

　　(3) 对比吸收光谱一致性

　　2.杂质检查

　　药物在紫外-可见光区有明显吸收，而杂质吸收弱;或杂质有明显吸收而药物无吸收，可通过控制吸收度限度来控制杂质量。

　　3.含量测定

　　(1) 对照品比较法：供试品溶液和对照品溶液浓度及测定条件应尽可能一致

　　(2) 吸收系数法：需对仪器进行严格校正和检定

　　(3) 计算分光光度法：通过数学处理消除样品中干扰组分的干扰

　　(4) 比色法：供试品与对照品同时操作

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