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支原体的大小为0.2～0.3um，可通过滤菌器，常给细胞培养工作带来污染的麻烦。菌落小（直径0.1～1.0mm），在固体培养基表面呈特有的“油煎蛋”状。无细胞壁，不能维持固定的形态而呈现多形性，对渗透压敏感，对抑制细胞壁合成的抗生素不敏感。革兰氏染色不易着色，故常用Giemsa染色法将其染成淡紫色。细胞膜中胆固醇含量较多，约占36%，对保持细胞膜的完整性具有一定作用。细胞膜含甾醇，比其他原核生物的膜更坚韧。凡能作用于胆固醇的物质（如二性霉素B、皂素等）均可引起支原体膜的破坏而使支原体死亡。
支原体基因组为一环状以双链DNA，分子量小（仅有大肠杆菌的五分之一），合成与代谢很有限。
肺炎支原体的一端有一种特殊的末端结构，能使支原体粘附于呼吸道粘膜上皮细胞表面，与致病性有关。
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